赛默飞荧光计qubit4.0操作流程及使用场所

Qubit 4.0 操作流程

准备工作

开机预热

连接电源，开机后仪器自动预热（约10分钟），预热完成屏幕显示主菜单。

试剂准备

根据检测物选择试剂盒（如DNA HS, RNA HS, Protein等），将试剂置于室温解冻（约5分钟）。

关键步骤 ：按比例混合荧光染料与缓冲液（例如：DNA HS试剂按1:200比例混合），涡旋混匀后避光保存。

样本检测步骤

创建实验程序

主菜单选择检测类型（如"dsDNA HS"）→ 选择标准曲线模式（新建或调用历史曲线）。

标准品制备

准备2个标准管（#1低浓度、#2高浓度）：

取190μL工作液 + 10μL标准品，涡旋混匀（避免气泡 ）。

样本制备

取198μL工作液 + 2μL待测样本（确保加样精准 ），涡旋混匀（同标准品）。

检测操作

打开检测仓 → 放入标准管和样本管 → 关闭仓门。

按"Start Run"开始检测（约3秒/样本），仪器自动读取浓度。

结果处理

屏幕显示浓度（如超出范围需稀释重测）→ 可导出数据至U盘（CSV格式）。

清洁与关机

取出所有检测管，用无绒布擦拭检测仓。

长按电源键关机，断开电源。

使用场所及典型应用

核心适用场景

分子生物学实验室

低浓度核酸定量 ：如NGS文库（Illumina/Ion Torrent）、微量DNA/RNA样本（cfDNA、单细胞样本）、PCR产物纯化后浓度验证。

优势 ：检测下限低至0.005 ng/μL（DNA HS），远优于分光光度法（Nanodrop）。

蛋白质研究

微量蛋白定量 ：使用Qubit Protein Assay试剂盒，检测范围0.04–5 μg（灵敏度高于BCA法）。

质量控制环节

样本制备流程关键点监控（如提取后浓度确认、文库构建前质检）。

不适用场景

高浓度样本 ：如浓度>100 ng/μL（需稀释或改用Broad Range试剂盒）。

含抑制剂样本 ：强酸/碱、去污剂可能干扰荧光信号（需纯化样本）。

快速粗定量 ：对精度要求不高时，Nanodrop更快捷。

关键注意事项

避免污染

使用无核酸酶/无RNase离心管，戴手套操作。

控制气泡：涡旋后静置30秒，确保管内无气泡（气泡会干扰光路）。

试剂稳定性：混合后的工作液需4℃避光保存，1周内用完 （过期试剂导致结果偏低）。

校准要求：每2年返厂校准一次，或使用标准品验证仪器准确性。

动态范围限制：不同试剂盒检测范围不同，超范围需更换试剂盒或稀释样本（如DNA HS：0.005–100 ng/μL）。

常见问题解决：

Qubit 4.0凭借其高灵敏度、抗污染物干扰能力 ，成为微量核酸/蛋白定量的金标准，尤其适用于下一代测序、单细胞分析、低丰度样本检测 等场景。精确操作流程与试剂规范是确保数据可靠性的核心。日常使用中需定期校准仪器、避免试剂污染，并在超出检测范围时及时调整策略