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追求合作共赢
Win win for you and me售前售中售后完整的服务体系
诚信经营质量保障价格合理服务完善一、操作前准备：保障实验基础
1. 环境与设备校验
环境要求 ：
温度：15-30℃（恒定±1℃）
湿度：≤80%
远离震动源（如离心机、摇床）
开机校验 ：
启动后执行自动光学校准 （≥30分钟预热）
使用标准校准板验证孔间信号一致性（CV值＜5%）
2. 耗材与试剂选择
专用耗材 ：
仅使用原厂认证96孔板 （如MicroAmp™ Optical Plate）
匹配光学级封膜 （防止蒸发与透光干扰）
试剂规范 ：
预混试剂提前解冻（冰上操作），避免反复冻融
反应体系推荐：20-50μL （低体积需校准加样精度）
二、标准化操作流程
Step 1 实验设计与软件设置
创建新程序：
命名实验（例：靶标分子_202405）
选择检测通道（FAM/VIC/ROX等，支持5通道同步）
设置反应程序：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 95℃→60℃ | 15 sec→1 min | 40 |
| 熔解曲线 | 95℃→60℃ | 15 sec→1 min | 1 |
Step 2 加样与上机
分区操作防污染 ：
试剂配制区（洁净台） → 样本处理区（生物安全柜） → 扩增分析区（独立空间）
反应体系构建：
模板DNA：≤100 ng/孔
引物/探针：按预混试剂说明书浓度添加
推荐体系：
预混试剂 10 μL + 引物探针 2 μL + 模板 3 μL + ddH₂O 5 μL
上机操作：
孔板轻震离心（避免气泡）
按A1→H12顺序 放置，确保孔位与软件匹配
Step 3 运行监控与数据分析
实时监控：
软件界面查看扩增曲线 与荧光阈值（ΔRn）
异常孔位标记（如信号跳跃、无扩增）
结果解读：
Ct值判定 ：阈值线设定在指数扩增期（建议自动计算）
熔解曲线 ：单峰=特异性扩增，多峰=引物二聚体
三、关键注意事项与排障方案
| 问题现象 | 原因分析 | 解决方案 |
| 孔间信号差异＞10% | 孔板透光不均 | 更换原厂认证耗材 |
| 扩增曲线呈锯齿状 | 反应体系气泡或污染 | 离心后重新上机；更换试剂 |
| ROX校正失败 | 光学模块污染 | 执行深度校准程序并清洁样品槽 |
| 温度控制超差±0.5℃ | 散热口堵塞 | 清理滤网，确保通风 |
四、日常维护与校准
每周维护 ：
用无绒布蘸70%乙醇清洁样品槽
检查散热滤网（积尘降低制冷效率）
五、安全与合规声明
本操作需在BSL-1级实验室 环境下进行：
穿戴实验服、手套及护目镜
废弃耗材按《实验室生物安全手册》分类处置
设备仅用于科研与质检用途
