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QuantStudio5实时荧光定量PCR系统操作指南

更新时间:2025-12-04      点击次数:13

一、核心操作流程(配流程图)

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1.1 开机与初始化

快速启动 :
接通电源 → 点击触摸屏激活系统 → 完成30秒自检(LED指示灯全绿表示就绪)

温控校准 :
第1次使用需执行"Calibration"模块,全程≤8分钟(自动生成校准报告)

1.2 实验方案设置

参数类型推荐设置优化建议
反应体积10-20μL(兼容96/384孔板)低至5μL可用专用密封膜
扩增程序预置8种模板(例如:Fast 40循环)可自定义梯度PCR参数
荧光通道五通道灵活配置支持SYBR Green/TaqMan 双体系

操作提示:拖拽式编程界面使流程搭建时间缩短70%

1.3 耗材装载规范

板位识别 :

条形码自动识别板型(支持SKU:A28141/A28142)

智能压板装置防错设计(压力值实时显示)

密封要求 :

光学密封膜(Cat. No. 4311971)透光率>99%

自动检测密封完整性(避免蒸发误差)

二、关键性能优化技巧

2.1 提升数据准确性

光学校准 :
每月执行"OptiCheck"(2分钟完成孔间均一性验证)

低丰度样本策略 :

1. 启用高灵敏度模式(HS选项)  

2. 增加循环数至45(Ct值>35时)  

3. 使用TaqMan预混液(检出限达1拷贝/μL)  

2.2 通量Z大化方案

工作模式每日处理量适用场景
标准96孔576样本基因表达谱分析
高速384孔2304样本大规模基因分型
双板位运行1152样本多组学联合研究
基于20小时连续运行计算

三、智能数据分析管理

3.1 四步完成结果解读

自动基线校正 :
算法智能识别背景荧光(支持手动调整)

阈值设定 :
默认采用ΔRn=0.2,或按ROX染料校准

多格式导出 :

PDF报告(含扩增曲线/熔解曲线)

Excel原始数据(含SD值)

云平台协作 

• 扫码上传至Thermo Fisher Cloud(项目组共享)  

• 在线进行ΔΔCt分析(无需本地软件)  

四、维护与质控指南

4.1 日常维护计划

周期操作项目耗时
每次使用后清洁样品槽(无尘布擦拭)2分钟
每月光学镜头除尘5分钟
每季度固件升级(WiFi自动推送)10分钟

4.2 质控流程(符合ISO 17025)

每周运行NIST标准品(SRM 2372)

验证参数:

斜率:-3.1~-3.5

R² ≥0.995

生成电子质控报告(支持审计追踪)

五、高频问题解决方案

Q1 孔间温度不均?
→ 执行"Plate Uniformity Test"(诊断结果自动优化温控参数)

Q2 荧光信号波动?
→ 检查:

密封膜完整性(更换Cat. No. 4311971)

光学镜面清洁度(使用专用清洁棒)

Q3 如何提升多色检测精度?
→ 启用光谱校正矩阵(预置TAMRA/Cy5补偿参数)